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Herstellung von Totalpräparaten (Spalteholz-Präparate)

Totalpräparate werden in drei Schritten hergestellt: Bleichen, Färben und Klären. Erst im letzten Schritt werden die Präparate durchscheinend und man kann den Färbeprozeß beurteilen. Die Dauer der einzelnen Schritte ist von der Größe (eigentlich der Dicke) des Materials abhängig.

Fixieren und Bleichen nach Spalteholz

Fixieren und Bleichen in getrennten Schritten. Aufarbeitung bereits fixierten Materials ist möglich.

Fixieren 10% neutrales Formol: Dauer und Menge nach Objektgröße
Auswaschen in Wasser
Bleichen 10 ml H $_{2}$ O $_{2}$ (Perhydrol) 40 $\ensuremath{^\circ}$ C, mehrere Tage, mehrmals wechseln
Fixieren 10 ml 10% Formol + 90 ml Wasser
Auswaschen in Wasser, Luftblasen im Vakuum entfernen.

Fixieren und Bleichen nach Lundvall

Fixieren und Bleichen in einem Schritt.

Fixieren/Bleichen
10ml 10% Formol
+10-20 ml 30 % Oxalsäure in 96% Alkohol
+90 ml Wasser
In dieser Lösung lassen, bis die Objekte weiß sind. Bei Trübung erneuern. Beschleunigung durch Erwärmen auf 40 $\ensuremath{^\circ}$ C. Notfalls mit H $_{2}$ O $_{2}$ nachbleichen.
Entfernen der Oxalsäure
Knorpel: 96 %-iger Alkohol
ansonsten: ein bis mehrere Tage in 1%-iger Ammoniak-Lsg. (evtl. mit H $_{2}$ O $_{2}$ zum Nachbleichen). Ebensolange in 10% Formol. Auswaschen mit Wasser, aufsteigende Alkoholreihe.

Färben

Mit diesen Färbungen werden lediglich die knorpeligen Bestandteile des Skeletts angefärbt. Man kann auch andere gewebsspezifische Färbungen durchführen.

Färbelösungen

0,25 g Toluidinblau	1g Methylgrün
100 ml 70 %-iger Alkohol	1000 ml 70%-iger Alkohol
1 ml Salzsäure	5 ml Eisessig
nach 24 h filtrieren
einige Tage bei 40 $\ensuremath{^\circ}$ C. Das Präparat muß vollständig und tief gefärbt sein.

Entfärben
0,25ml Salzsäure in 100 ml 70%-igem Alkohol, mehrere Tage, öfter wechseln.
Auswaschen in 96% -igem Alkohol
Klären: erst hier wird das Präparat transparent !
Überführen in absoluten Alkohol $\rightarrow$ Ethanol-Rotihistol 1:1 $\rightarrow$ Rotihistol $\rightarrow$ Rotihistol-Methylbenzoat 1:1 $\rightarrow$ Aufbewahren in Methylbenzoat $\downarrow$

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Hans-Peter Rangol